Stable isotope labelling using amino acids in cell culture (SILAC),即细胞培养条件下的稳定同位素标记法,利用天然同位素(轻型,light)或稳定的同位素标记(重型,heavy)的必需氨基酸取代细胞培养基中的对应氨基酸,经过>6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸将完全参入细胞新合成的蛋白质中。不同标记细胞的裂解蛋白按照细胞数或蛋白量等比例混合,经纯化,分离后进行质谱鉴定,从而实现相对定量。
与体外化学标记相比,SILAC具有以下优势:
体内标记技术,标记效率高;
活体标记,更接近样品真实状态
SILAC不足:
操作复杂,实验周期长,成本较高
应用方向:
药物作用靶点研究;
疾病标志物筛选;
作用机制研究